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研究進展 || 多株沙門氏菌在亞硫酸鉍瓊脂(BS)上的生長情況
沙門氏菌是世(shi)界(jie)上食源性腹瀉最常見的病原菌之一。全(quan)球每年估計發生13億(yi)因(yin)沙門氏(shi)菌導致(zhi)的急性(xing)腸胃炎病(bing)例(li),其(qi)中300萬患(huan)者死(si)亡。我國沙門氏菌(jun)(jun)食(shi)物(wu)中毒(du)多年(nian)來居細菌(jun)(jun)性食(shi)物(wu)中毒(du)的首位,英(ying)國吉百利巧克力事(shi)件、美國的花(hua)生醬事(shi)件、匈(xiong)牙(ya)利400多(duo)人(ren)甜食中毒事件等等,均是沙門氏菌污染所致,引起了各國重(zhong)視,并將其列(lie)為出(chu)入(ru)境檢(jian)驗(yan)檢(jian)疫的法定(ding)檢(jian)查項目。
沙門氏菌在水中可生存2-3周,冰箱中可生存3-4個月,在自然環境的糞便中可存活1-2個月。沙門氏菌最適繁殖溫度為37℃,在20℃以上即能大量繁殖,因此,低溫儲存食品是一項重要預防措施。
沙門檢測之BS瓊(qiong)脂
該(gai)培養(yang)基中(zhong)蛋白胨、牛肉膏為細(xi)菌生(sheng)長提供(gong)所需的氮(dan)源、營養(yang)物質等;葡萄糖作為碳源;磷酸氫二鈉為培養基緩沖劑;煌綠和亞硫酸鈉可抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長,但對沙門氏菌的生長無影響;傷寒沙門氏菌和其他沙門氏菌可利用葡萄糖,將亞硫酸鹽還原成硫化物并與硫酸亞鐵反應使得菌落呈黑色,同時將鉍離子還原成金屬鉍使菌落呈現金屬光澤;瓊脂為凝固劑。
培養(yang)基配制(zhi)注(zhu)意事項:本培養(yang)基不(bu)需要(yao)高(gao)壓(ya)滅菌,在制(zhi)備過程中不(bu)宜(yi)過分加熱,避免降低其選擇性;宜(yi)于當天配置第二天使用,配置后(hou)平(ping)板為淡綠色不(bu)透明的凝膠狀固(gu)體。
BS瓊(qiong)脂培養基質量要(yao)求
在GB4789.28-2013 培養基和試劑的質量要求中關于亞硫酸鉍瓊脂(BS)的質(zhi)量控(kong)制標準為:
自本實驗室中選取11株沙門氏菌在TSB肉湯中活化后接種于BS瓊脂平板,36℃±1℃培養40h-48h觀察不同沙門氏菌的菌落形態,是否均產生金屬光澤。
具體沙門氏菌菌株如下:
置于(yu)36℃±1℃,培養40h時觀察產(chan)生金屬(shu)光澤的情況。
經觀察(cha),以(yi)上11株沙(sha)門氏菌培養(yang)后(hou)為黑色或灰綠色菌落,均產生明(ming)顯的金屬光澤,不同菌株的菌落形態略有差異,回收率均在87%以上。
具體沙(sha)門(men)氏菌菌落形(xing)態參考下圖(tu):
本(ben)培養(yang)基要求抑制(zhi)大(da)腸埃希氏(shi)(shi)菌,避免對沙(sha)門氏(shi)(shi)菌的分(fen)離產生干(gan)擾;同時(shi)抑制(zhi)革蘭氏(shi)(shi)陽(yang)性(xing)菌-糞腸球菌,故自實驗室中選取5株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌進行驗證。
36℃培養40h后計數生長指數G值,結果如下:
經(jing)試驗(yan)驗(yan)證,5株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌均被抑制。
亞硫酸鉍瓊脂(BS)(產品號:12C04)平板上生長的多株沙門氏菌的菌落形態典型,可產生明顯的金屬光澤,易與其他雜菌區分。在進行沙門氏菌檢測的過程中,同時需要與其他選擇性分離平板(如XLD、HE或沙(sha)門氏菌顯色培養基)上分離的典型和可疑菌落純(chun)化后(hou)進行后(hou)續(xu)的生化與血清學鑒定,綜(zong)合(he)分析判斷是否為沙(sha)門氏菌。