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溴(xiu)化十(shi)六烷基(ji)三甲銨瓊(qiong)脂培養(yang)(yang)基(ji) (Cetrimide Agar Medium) 是各國藥(yao)典普遍收載的控制菌檢查固(gu)體培養(yang)(yang)基(ji), 用于(yu)銅綠(lv)假單胞菌的劃(hua)線分離(li)培養(yang)(yang)。首(shou)先我們(men)看一下(xia)溴(xiu)化十(shi)六烷基(ji)三甲銨瓊(qiong)脂培養(yang)(yang)基(ji)的配方和(he)作用：

（1）營養(yang)成分：銅(tong)綠假單胞菌分解蛋白質能力較強，而發酵糖類能力較低，在培養基組分中明膠胰酶水解物和甘油為銅(tong)綠假單胞菌的(de)生(sheng)長提供碳、氮源、維(wei)生(sheng)素和生(sheng)長因子。

（2）無機鹽(yan)：氯化鎂和(he)硫酸(suan)鉀可以(yi)促(cu)進綠膿菌素的產(chan)生，并維持(chi)滲透壓。

（3）選擇性(xing)培(pei)養的原理(li)：溴化十六烷基(ji)三甲銨(an)(cetrimide)作為一種季銨(an)鹽陽(yang)離子表面活性(xing)(xing)劑(ji)，通過(guo)改變細菌(jun)細胞的(de)通透(tou)性(xing)(xing)，使細菌(jun)發(fa)生自溶或引起菌(jun)體(ti)蛋白質變性(xing)(xing)沉淀，導(dao)致細菌(jun)死亡，有較強的(de)抑菌(jun)作用。銅(tong)綠假單(dan)(dan)胞菌(jun)對(dui)溴化十六烷基(ji)三甲銨(an)有一定的(de)耐(nai)受(shou)性(xing)(xing)，因此，被用于銅(tong)綠假單(dan)(dan)胞菌(jun)的(de)選擇培(pei)養(yang)。

（4）顏色：銅(tong)綠(lv)(lv)假單胞菌(jun)生長過程中會產生兩種水溶(rong)性色素：黃(huang)(huang)色的熒光(guang)素和綠(lv)(lv)色的綠(lv)(lv)膿(nong)菌(jun)素，所以在溴化十六烷(wan)基三甲銨瓊脂平板上菌(jun)落呈(cheng)黃(huang)(huang)綠(lv)(lv)色。

以疑似(si)銅綠假(jia)單胞菌的(de)溴化十六烷基三甲銨瓊脂培(pei)養物或疑似(si)菌分離(li)純化的(de)TSA培(pei)養物做后續生化試驗。

（1）氧化酶試驗

方法：挑取可(ke)疑菌落(luo)于潔凈的濾紙片上，滴加1%二鹽酸N，N-二甲基對(dui)苯二胺試(shi)劑，30秒內(nei)出現粉紅(hong)色(se)并逐漸變為紫紅(hong)色(se)，為氧化酶試(shi)驗陽性(xing)反應(ying)。若(ruo)培養物不變色(se)或(huo)僅(jin)顯粉色(se)為陰(yin)性(xing)反應(ying)。

原(yuan)理：銅綠假單胞(bao)(bao)(bao)菌含有細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)色(se)素氧(yang)化(hua)酶(mei)，該(gai)酶(mei)是細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)色(se)素呼吸酶(mei)系統的最終呼吸酶(mei)。具有氧(yang)化(hua)酶(mei)的細(xi)(xi)菌，首(shou)先使(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)色(se)素C氧(yang)化(hua)，再(zai)由氧(yang)化(hua)型(xing)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)色(se)素C使(shi)對苯二胺氧(yang)化(hua)，生成(cheng)有色(se)（如粉紅色(se)或(huo)紫紅色(se)）的醌類(lei)化(hua)合物。

（2）綠膿(nong)菌素生成試驗

方法：挑取(qu)(qu)可疑菌(jun)(jun)落接種在(zai)(zai)在(zai)(zai)綠(lv)膿菌(jun)(jun)素測定用(yong)培養(yang)基（PDP）斜面上，培養(yang)24小時，觀察斜面有無色素。如有色素，在(zai)(zai)試(shi)管內加(jia)氯(lv)(lv)(lv)仿3.0～5.0mL，充分(fen)震搖，使(shi)培養(yang)物中的(de)綠(lv)膿菌(jun)(jun)素提(ti)取(qu)(qu)在(zai)(zai)氯(lv)(lv)(lv)仿中，待氯(lv)(lv)(lv)仿提(ti)取(qu)(qu)液(ye)呈(cheng)(cheng)現綠(lv)色時，加(jia)1mol/L鹽酸(suan)約1mL，震搖后靜置片刻，上層鹽酸(suan)溶液(ye)中呈(cheng)(cheng)現粉紅至紅色實(shi)驗結果為陽性(xing)(xing)，否則(ze)為陰(yin)性(xing)(xing)。

原理：銅綠假單胞菌能(neng)產(chan)生的(de)綠膿菌素能(neng)被氯仿(fang)提取，且在水(shui)中(zhong)溶(rong)解(jie)度比氯仿(fang)大，并(bing)且會(hui)發生可逆的(de)氧化(hua)還(huan)原反應，氧化(hua)時堿性(xing)呈(cheng)藍(lan)色，酸性(xing)呈(cheng)紅(hong)色。所以加(jia)入鹽酸溶(rong)液并(bing)震(zhen)搖(yao)后(hou)，綠膿菌素會(hui)由氯仿(fang)轉移至(zhi)鹽酸溶(rong)液中(zhong)，并(bing)在酸性(xing)環(huan)境中(zhong)呈(cheng)紅(hong)色。
 

（3）硝酸鹽還(huan)原產氣試驗

方法(fa)：取(qu)可疑菌(jun)落接種在含小導管(guan)的硝酸鹽(yan)蛋白胨水(shui)培(pei)養基(ji)內，35℃培(pei)養24小時，小導管(guan)內有氣(qi)體產(chan)生實驗結果為(wei)陽性，否則(ze)為(wei)陰性。

原理：銅綠假單胞菌是(shi)一類兼(jian)性(xing)好氧(yang)、以有(you)機(ji)碳作為能源(yuan)的(de)異養硝化菌，能通過產(chan)生的(de)酶分四步還原硝酸鹽，將硝酸鹽分解產(chan)生氮氣。

（4）42℃生長(chang)試驗(yan)

方法：以接(jie)(jie)種環沾取少許TSA培(pei)養(yang)物(wu)于(yu)0.9%無菌(jun)(jun)氯(lv)化鈉(na)溶(rong)液(ye)中(zhong)，制成菌(jun)(jun)懸(xuan)液(ye)。將菌(jun)(jun)懸(xuan)液(ye)劃線接(jie)(jie)種于(yu)TSA斜面(mian)上，置41±1℃培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)24-48小時，斜面(mian)上如有(you)菌(jun)(jun)苔(tai)生長為陽(yang)(yang)性(xing)反應，無菌(jun)(jun)苔(tai)生長為陰性(xing)反應。銅綠(lv)假單胞菌(jun)(jun)生長實(shi)驗(yan)結果(guo)為陽(yang)(yang)性(xing)。

原理：致病(bing)性銅綠(lv)假(jia)單(dan)胞(bao)菌(jun)(jun)能在42℃條件下(xia)生(sheng)長，同屬的熒(ying)光(guang)假(jia)單(dan)胞(bao)菌(jun)(jun)和惡臭假(jia)單(dan)胞(bao)菌(jun)(jun)都不能生(sheng)長。

（5）明膠液化試驗

方法：取可疑菌落穿刺接種在(zai)明膠培養基內，35℃培養24小時，取出后放2-8度冰箱10-30min，如果仍為液體，實驗結果為陽性，否(fou)則為陰性。

原理：是(shi)利(li)用銅綠假單胞菌產生胞外酶（明膠(jiao)酶），使明膠(jiao)分解(jie)為氨基酸，從而失去(qu)凝固力，半固體(ti)的明膠(jiao)培養基成為流動的液體(ti)。

（1）供試品培養物經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶試驗及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即報告1g或1ml供試品檢出銅綠假單胞菌；
（2）供試品培養物氧化酶陽性，鏡檢革蘭氏陰性桿菌，綠膿菌素試驗陰性時硝酸鹽還原產氣試驗，42℃生長試驗及明膠液化試驗皆為陽性時，報告1g或1ml供試品檢出銅綠假單胞菌；
（3）與（1）和（2）結果不符，報告1g或1ml供試品未檢出銅綠假單胞菌。