建立(li)支原(yuan)體培養基靈(ling)敏度(du)檢査(cha)（變色單位試(shi)驗法）及供(gong)試(shi)品(pin)檢查方(fang)法。除(chu)藥典推(tui)薦培養基外，亦可使用(yong)可支持支原(yuan)體生長的其他培養基，但靈(ling)敏度(du)必須(xu)符合要求。
培養(yang)基與(yu)菌種對應關系如下(xia)表。
《中國藥典》2015 年版 第四部(bu) 3301 支原(yuan)體檢查法。
靈(ling)敏(min)度檢查（變色單位試驗法(fa)）
（1）試管：螺口(kou)旋蓋(gai)試管，利于(yu)培(pei)養(yang)時(shi)(shi)(shi)保(bao)持密(mi)閉；或者(zhe)(zhe)普通(tong)玻璃(li)中試管，滅菌時(shi)(shi)(shi)使用(yong)硅(gui)膠(jiao)塞，培(pei)養(yang)時(shi)(shi)(shi)換成橡(xiang)膠(jiao)塞；或者(zhe)(zhe)培(pei)養(yang)時(shi)(shi)(shi)使用(yong)無菌液(ye)體石蠟液(ye)封(feng)。
（2）新生(sheng)牛(niu)血清(qing)。
（3）滅菌(jun)柜、生(sheng)物(wu)安全(quan)柜、生(sheng)化培養箱等。
（1）基(ji)礎培養(yang)基(ji)：按標簽所示(shi)配制(zhi)方法制(zhi)備(bei)，分裝8mL/支，滅菌，待用(yong)。
（2）完全(quan)培養基：臨(lin)用前(qian)每支8mL基礎培養基中加(jia)入2mL新生牛血(xue)清(qing)。
注：半流體培(pei)(pei)養基(ji)在使用前應(ying)煮沸(fei)10?15分鐘，冷卻至(zhi)56°C左右，然后加入(ru)新生牛血清（培(pei)(pei)養基(ji)：血清為 8：2），并(bing)可酌情加入(ru)適量抑菌劑（青(qing)霉素等(deng)），充分搖勻。基(ji)礎培(pei)(pei)養基(ji)，2-8℃可保(bao)存3個月。
將菌種接種于適宜的支原體培養基中，經36C±1℃密閉培養至培養基變色, 盲傳兩代。
接種時建議做(zuo)梯度稀釋，選取剛變(bian)色的培養物進行下步(bu)試驗。（培養時間(jian)太久，支原體容易死亡）
選取變色的新鮮培養物，接種至待檢培養基中，做10倍系列稀釋，肺炎支原體稀釋至 10-7~10-9，接種在支原體肉湯/半流體培養基內；口腔支原體稀釋至10-3~10-5，接種在精氨酸支原體肉湯/半流體培養基內。每個稀釋度接種3支試管，置36°C±1°C密閉培養7?14天，觀察培養基變色結果。
以接種后培養基管數的 2/3 以上呈現變色的最高稀釋度為該培養基的靈敏度。
靈敏度應達到：
支原體肉湯/半流體培養基：肺炎支原體應達到10-8；精氨酸(suan)支(zhi)(zhi)原體肉湯/半流體培養基：口(kou)腔支(zhi)(zhi)原體應達到 10- 4。
陽(yang)性參考(kao)圖(tu)例（僅供(gong)參考(kao)）
